1. 準備0-1天內的C57BL/6J小鼠新生鼠。

2. 用溫的無菌去離子水，輕輕擦拭每只新生鼠。

3. 用70%的乙醇徹底去除新生鼠身體上的污染物。

4. 斷頭，取心臟，心臟置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心臟組織。

6. 剪碎心臟組織。

7. 加入胰酶-膠原酶消化液，每只新生鼠75ul。

8. 在37°C的搖床培養箱中，以250 rpm/ 5 min，消化心肌組織。

9. 輕輕渦旋，然后離心10秒，丟棄第一次消化的上清液。

10. 開始第二次消化，250 rpm/ 5 min后，輕輕渦旋，然后離心10秒，收集上清液到2倍體積的胎牛血清中。

11. 重復上述消化過程，共進行8次消化，收集細胞懸液。

12. 使用沒有包被的10cm大皿，預種植細胞1h。

13. 1小時后，將培養皿從培養箱中取出，移除沒貼壁的細胞及上清液，加入完全培養基繼續培養。