蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡(jiǎn)稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中較基本、使用廣泛的技術(shù)方法。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1,石蠟切片脫蠟至水
依次將切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。
2,蘇木素染細(xì)胞核
切片入Harris蘇木素染3-8min,自來(lái)水洗,1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來(lái)水沖洗,0.6%氨水返藍(lán),流水沖洗。
3,伊紅染細(xì)胞質(zhì)
切片入伊紅染液中染色1-3min。
4,脫水封片
將切片依次放入95%酒精I(xiàn) 5min -95%酒精I(xiàn)I 5min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min -無(wú)水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來(lái)稍晾干,中性樹(shù)膠封片。
5,顯微鏡鏡檢,圖像采集分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。
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