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TUNEL檢測(cè)

簡(jiǎn)要描述:TUNEL(TdT-mediated DUTP nick end labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用來(lái)檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡早期過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。

  • 更新時(shí)間:2024-02-21 00:00:00
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詳細(xì)介紹

TUNEL染色操作方法:

(1)固定:將細(xì)胞爬片用0.02M PBS洗去培養(yǎng)基,再用4%甲醛固定30min,0.02M PBS洗3min×3次。

(2)消化:將細(xì)胞爬片浸入胰蛋白酶內(nèi)消化40分鐘,PBS洗3min×3次。

(3)制備TUNEL反應(yīng)混合液,用50μl TdT+450μl 熒光素標(biāo)記的dUTP液混勻。

(4)加50μl TUNEL反應(yīng)混合液于細(xì)胞爬片上,在暗濕盒中反應(yīng)37℃反應(yīng)1h;PBS洗3min×3次。

(5)加50ul POD于細(xì)胞爬片上,在暗濕盒中反應(yīng)37℃×30min,PBS洗3min×3次。

(6)DAB染色3-10min,自來(lái)水沖洗,蘇木素復(fù)染, 1%鹽酸酒精分化,顯微鏡下觀察,控制染色程度。

(7)脫水:75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精,逐級(jí)脫水、各3min。

(8)透明:二甲苯透明3min×2次。

(9)中性樹(shù)膠封片。 

(10)通過(guò)顯微鏡采集分析樣本相關(guān)部位,計(jì)算凋亡率。

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