TUNEL檢測(cè)

簡(jiǎn)要描述：TUNEL(TdT-mediated DUTP nick end labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用來(lái)檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡早期過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。

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詳細(xì)介紹

TUNEL染色操作方法：

（1）固定：將細(xì)胞爬片用0.02M PBS洗去培養(yǎng)基，再用4%甲醛固定30min，0.02M PBS洗3min×3次。

（2）消化：將細(xì)胞爬片浸入胰蛋白酶內(nèi)消化40分鐘，PBS洗3min×3次。

（3）制備TUNEL反應(yīng)混合液，用50μl TdT+450μl 熒光素標(biāo)記的dUTP液混勻。

（4）加50μl TUNEL反應(yīng)混合液于細(xì)胞爬片上，在暗濕盒中反應(yīng)37℃反應(yīng)1h；PBS洗3min×3次。

（5）加50ul POD于細(xì)胞爬片上，在暗濕盒中反應(yīng)37℃×30min，PBS洗3min×3次。

（6）DAB染色3-10min，自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染， 1%鹽酸酒精分化，顯微鏡下觀察，控制染色程度。

（7）脫水：75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精，逐級(jí)脫水、各3min。

（8）透明：二甲苯透明3min×2次。

（9）中性樹(shù)膠封片。

（10）通過(guò)顯微鏡采集分析樣本相關(guān)部位，計(jì)算凋亡率。

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