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簡(jiǎn)要描述:裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)是腫瘤研究中常用的實(shí)驗(yàn),常用免疫缺陷型小鼠來作為移植瘤模型的載體,通過對(duì)該小鼠的注射腫瘤細(xì)胞,使其成瘤,觀察流體的生長(zhǎng)來判斷其生物學(xué)變化。
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裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)是腫瘤研究中常用的實(shí)驗(yàn),常用免疫缺陷型小鼠來作為移植瘤模型的載體,通過對(duì)該小鼠的注射腫瘤細(xì)胞,使其成瘤,觀察流體的生長(zhǎng)來判斷其生物學(xué)變化。
裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)過程:
1、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵,所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好,取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍,目的為去除細(xì)胞中殘余的血清。
3、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度,一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5x10^6個(gè)細(xì)胞/支,接種體積為0.1-0.2ml ,因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5x 10^7個(gè)細(xì)胞/ml,如若有條件的實(shí)驗(yàn)室,也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成,基質(zhì)膠與PBS或無血清的比列為1:1。
4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下,一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成(如果接種量大,可以分批接種) ,途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝以保持細(xì)胞的活性。
5、選擇的裸鼠一般在4-6周齡,體重16-18g左右,種植部位選擇血供豐富區(qū)域,如腋窩中后部。
6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散,防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率,導(dǎo)致小鼠接種細(xì)胞數(shù)量的差異過大。
7、接種時(shí),針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn),約1cm深,針頭在皮下左右滑動(dòng)幾次,以便細(xì)胞接種成團(tuán),減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。
8、接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。
9、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量,一般皮 下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長(zhǎng)過大,一般不要超過2000mm3。
10、腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次,游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位。V= 1/2*a*b2 (a為長(zhǎng)軸,b為短軸)。
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