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淺析分子克隆的原理及操作步驟

更新時間:2022-09-08 00:00:00       點擊次數:3763

        克隆(clone,clon)一詞源于希臘文Klon,原意為樹木的枝條。在生物學中其名詞含義系指一個細胞或個體以無性繁殖的方式產生一群細胞或一群個體,在不發生突變的情況下,具有完全相同的遺傳性狀,常稱無性繁殖(細胞)系;其動詞(clone,cloned,cloning)含義指在生物體外用重組技術將特定基因插入載體分子中,即分子克隆技術。研究基因的第一步是分離它并獲得許多與它完全相同的拷貝。這稱為“克隆”基因。一個基因被克隆的過程稱為分子克隆
       分子克隆是指分離一個已知DNA序列,并以in vivo(活體內)方式獲得許多復制品的過程。這一復制過程經常被用于增加并獲取DNA片段中的基因,但也可用來增加某些任意的DNA序列,如啟動子、非編碼序列、化學合成的寡核苷酸或是隨機的DNA片斷。
PCR技術:使DNA分子先解螺旋,然后以得到的單戀為模版進行復制。

步驟:
  1.DNA變性(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下, 氫鍵斷裂,形成單鏈DNA
  2.退火(25℃-65℃):系統溫度降低,引物與DNA模板結合,形成局部雙鏈。
  3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性較好)的作用下,以dNTP為原料,從引物的5′端→3′端延伸,合成與模板互補的DNA鏈。
  每一循環經過變性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。 

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