<tfoot id="2wsoi"></tfoot>

<ul id="2wsoi"></ul>

分子克隆與載體構(gòu)建

簡(jiǎn)要描述：DNA片段的克隆需要合適的載體，載體或是質(zhì)粒，或是噬菌體，或是病毒，通常大多經(jīng)過人工改造。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細(xì)胞內(nèi)必須能自主復(fù)制，即必須具備復(fù)制原點(diǎn)；二是該載體必須具備適合的酶切位點(diǎn)，且這些酶切位點(diǎn)不在復(fù)制原點(diǎn)區(qū)域內(nèi)。以上兩條，保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽隆克隆，載體上常有篩選標(biāo)記，如對(duì)抗菌素的抗性，某些基因產(chǎn)物的顯色反應(yīng)等。

更新時(shí)間：2024-02-21 00:00:00
訪問量：4575

產(chǎn)品咨詢聯(lián)系我們

服務(wù)分類

相關(guān)文章

相關(guān)新聞

詳細(xì)介紹

一、分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)Molecular cloning 服務(wù)介紹

分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再從篩選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。

二、分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)Molecular cloning 實(shí)驗(yàn)原理

外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2%2B、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中，將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個(gè)帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能，而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒有的特性，即能使兩個(gè)平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低，一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。

T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步：先，T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復(fù)合物；然后，酶—AMP復(fù)合物再結(jié)合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化；后產(chǎn)生一個(gè)新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。

DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。

連接反應(yīng)的溫度在37℃時(shí)有利于連接酶的活性.但是在這個(gè)溫度下，粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個(gè)折中溫度，即12-16℃，連接12-16h(過夜)，這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對(duì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。

產(chǎn)品咨詢

留言框

產(chǎn)品：
留言內(nèi)容：
您的單位：
您的姓名：
聯(lián)系電話：
常用郵箱：
詳細(xì)地址：
驗(yàn)證碼：

无遮挡粉嫩小泬久久久久久久,国产CHINESE男男GAY,性XXXX欧美老妇胖老太,午夜18禁试看120秒男女啪啪

分子克隆與載體構(gòu)建

留言框

產(chǎn)品：

留言內(nèi)容：

您的單位：

您的姓名：

聯(lián)系電話：

常用郵箱：

詳細(xì)地址：

驗(yàn)證碼：