原代分離

簡要描述：原代分離是指將生物體組織或器官或細胞，從體內或體外分離出來，使其與生物體分離，進而培養生長，同時與生物體的變化無關。原代分離對于生物學的研究有著重要的意義，可以獲得大量的細胞或組織的原始文化，研究其生長和分化、代謝、功能等方面的特性。

更新時間：2024-02-21 00:00:00
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原代分離是指將生物體組織或器官或細胞，從體內或體外分離出來，使其與生物體分離，進而培養生長，同時與生物體的變化無關。原代分離對于生物學的研究有著重要的意義，可以獲得大量的細胞或組織的原始文化，研究其生長和分化、代謝、功能等方面的特性。

一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用10000 min的低速離心10分鐘，若懸液量大，可適當延長離心時間，但速度不能太高，延時也不能太長，以避免擠壓或機械損傷細胞，離心沉淀用無鈣、鎂PBS洗兩次，用培養基洗- -次后，調整適當細胞濃度后再分瓶培養,若選用懸液中某些細胞，常采用離心后的細胞分層液，因為，經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據需要收獲目的細胞。不同比重的分層液的配制和具體分離方法詳見淋巴細胞分離培養的章節。

二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密,為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機械分散法
所取材料若纖維成分很少，如腦組織，部分胚胎組織可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散組織細胞或將已充分剪碎分散的組織放在注射器內(用九號針) ,使細胞通過針頭壓出，或在不銹鋼紗網內用鈍物壓擠(常用注射器鈍端)使細胞從網孔中壓擠出。此法分離細胞雖然簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差。此法僅適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松,由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后,細胞容易貼壁生長。

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